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      土壤亮氨酸氨基肽酶試劑盒說明書-相關(guān)技術(shù)文章

      更新時間:2025-02-17      瀏覽次數(shù):526


      土壤亮氨酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP

       

      試劑盒說明書

      微量法 100 /48 

       

      正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

      S-LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP 活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

      測定原理:

      S-LAP 分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺,后者在 405nm 有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算S-LAP 活性。

      試劑的組成和配制:

       

      產(chǎn)品名稱

      BO6031-100T/48S

      Storage

      試劑一:液體

      35ml

      4℃

      試劑二:粉劑

      1

      -20℃

      說明書

      一份

      自備儀器和用品:

      酶標(biāo)儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。

      S-LAP 測定步驟:

      1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 405nm,蒸餾水調(diào)零。

      2、在試劑二瓶中加入 15ml 試劑一充分溶解(如較難溶解,可 60℃水浴加熱約 30min 促進溶解);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

      3、操作表:

      試劑名稱

      對照管

      測定管

      新鮮土樣g

      0.05

      0.05

      試劑一μl

      300


      試劑二μl


      300

      混勻, 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后,8000g 4℃離心 10min,取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中,405nm 處測定吸光值 A,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

      S-LAP 活力單位的計算:

      a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

      單位的定義:每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

      S-LAPμmol/d /g 土樣)=ΔA×V 反總÷ε×d×106÷W÷T=14.8×ΔA

      V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; W:樣本質(zhì)量,0.05g。

      b.  96 孔板測定的計算公式如下

      單位的定義:每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

      S-LAPμmol/d /g 土樣)=ΔA×V 反總÷ε×d×106÷W÷T=29.6×ΔA

      V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,0.5cm;T:反應(yīng)時間,1h=1/24d W:樣本質(zhì)量,0.05g。


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